Mapa de Péptidos, MAM

Mapas completos de péptidos, simplificados

Para generar un mapa de péptidos, primero se debe digerir la proteína terapéutica en sus péptidos constituyentes mediante una reacción química o enzimática.

La separación e identificación robustas de los péptidos resultantes proporcionará información sobre la  secuencia completa de una proteína, mostrando cada componente de aminoácido y el microambiente de aminoácidos circundante, incluida la información de enlace disulfuro.

La caracterización estructural a este nivel destaca las modificaciones postraduccionales (PTM), como la glicosilación específica del sitio, las sustituciones de aminoácidos (variantes de secuencia) y/o los truncamientos que pueden resultar de la transcripción errónea del ADN complementario.

Dentro de un entorno de bioproducción, el mapeo de péptidos es necesario para el control de calidad y el control del proceso de fabricación. El mapeo de péptidos facilita las pruebas de comparabilidad del producto, que son necesarias para identificar cualquier impureza relacionada, como la desamidación y/o la oxidación después de cualquier formulación, proceso de fabricación o cambio de almacenamiento.

Debido a su complejidad y variabilidad inherente, el mapeo de péptidos generalmente se realiza de manera comparativa; por ejemplo, los biosimilares se compararían con una sustancia de referencia o de control, como el biológico innovador, en un experimento paralelo. Se requiere ahora un análisis en profundidad para identificar diferencias menores e incluso isobáricas en la estructura primaria de la proteína.

El laboratorio de investigación biofarmacéutica y de proteínas moderno tiene la tarea de proporcionar resultados analíticos de alta calidad, a menudo en entornos regulados de alto rendimiento. Algunas tecnologías empleadas actualmente para el mapeo de péptidos biofarmacéuticos están sujetas a altos niveles de irreproducibilidad, baja sensibilidad y altos niveles de trabajo manual que consume mucho tiempo, con metodologías prolongadas que no son susceptibles de automatización y que a menudo requieren 24 horas para lograr la digestión completa de proteínas.

Esta variabilidad afecta la confianza de los datos. Además, aumenta el potencial de introducción de artefactos no relacionados con el producto durante la manipulación manual de muestras.

La solución Multi-Attribute Method (MAM)

MAM ha sido ampliamente adoptado por la industria bioterapéutica y los principales regularoder en los últimos años. Las principales empresas biofarmacéuticas están realizando inversiones significativas para establecer un flujo de trabajo MAM para probar en el futuro el desarrollo y la fabricación de sus productos bioterapéuticos.

Históricamente, la implementación MAM no ha sido fácil ni rápida debido a la ausencia de una solución MAM comercial completa. Los científicos han tenido que ensamblar múltiples componentes de hardware y software diseñados originalmente para diferentes propósitos. Tales soluciones MAM a menudo requieren usuarios expertos en MS y no están libres de desafíos cuando se implementan en entornos de control de calidad y desarrollo de procesos.

Siendo el proveedor líder de soluciones bioterapéuticas y un socio confiable, Thermo Fisher Scientific ha estado trabajando en estrecha colaboración con los líderes de la industria para desarrollar una solución MAM perfecta y adecuada para su propósito. Se ha logrado una mejora significativa con la introducción de Thermo Scientific MAM 2.0 desde el lanzamiento inicial de HR MAM en 2019.