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  • Columnas Thermo Scientific para Mapa de Péptidos y MAM

    Columnas de Alta Resolución para Pep Mapping y MAM

Mapa de péptidos biofarmacéuticos

El Mapa de Péptidos es un flujo de trabajo crítico en la caracterización bioterapéutica de proteínas y es esencial para dilucidar la estructura primaria de aminoácidos de las proteínas.

Para los productos farmacéuticos de proteínas recombinantes, como los anticuerpos monoclonales (mAb) y los conjugados de anticuerpo y fármaco (ADC), el mapeo de péptidos se utiliza como prueba de identidad, de la caracterización estructural primaria y como garantía/control de calidad (QA/QC).

Las agencias reguladoras globales, incluida la Administración de Alimentos y Medicamentos de EE. UU. (FDA de EE. UU.) y la Agencia Europea de Medicamentos (EMA), buscan pautas armonizadas del Consejo Internacional para la Armonización (ICH).

ICH Q6B cubre los procedimientos de prueba y los criterios de aceptación para productos farmacéuticos biológicos, y especifica el uso del mapeo de péptidos como un procedimiento de prueba de calidad crítico para la caracterización de medicamentos que se utiliza para confirmar la estructura deseada del producto para fines de liberación de lotes.

Mapas completos de péptidos, simplificados

Para generar un mapa de péptidos, primero se debe digerir la proteína terapéutica en sus péptidos constituyentes mediante una reacción química o enzimática.

La separación e identificación robustas de los péptidos resultantes proporcionará información sobre la  secuencia completa de una proteína, mostrando cada componente de aminoácido y el microambiente de aminoácidos circundante, incluida la información de enlace disulfuro.

La caracterización estructural a este nivel destaca las modificaciones postraduccionales (PTM), como la glicosilación específica del sitio, las sustituciones de aminoácidos (variantes de secuencia) y/o los truncamientos que pueden resultar de la transcripción errónea del ADN complementario.

Dentro de un entorno de bioproducción, el mapeo de péptidos es necesario para el control de calidad y el control del proceso de fabricación. El mapeo de péptidos facilita las pruebas de comparabilidad del producto, que son necesarias para identificar cualquier impureza relacionada, como la desamidación y/o la oxidación después de cualquier formulación, proceso de fabricación o cambio de almacenamiento.

Debido a su complejidad y variabilidad inherente, el mapeo de péptidos generalmente se realiza de manera comparativa; por ejemplo, los biosimilares se compararían con una sustancia de referencia o de control, como el biológico innovador, en un experimento paralelo. Se requiere ahora un análisis en profundidad para identificar diferencias menores e incluso isobáricas en la estructura primaria de la proteína.

El laboratorio de investigación biofarmacéutica y de proteínas moderno tiene la tarea de proporcionar resultados analíticos de alta calidad, a menudo en entornos regulados de alto rendimiento. Algunas tecnologías empleadas actualmente para el mapeo de péptidos biofarmacéuticos están sujetas a altos niveles de irreproducibilidad, baja sensibilidad y altos niveles de trabajo manual que consume mucho tiempo, con metodologías prolongadas que no son susceptibles de automatización y que a menudo requieren 24 horas para lograr la digestión completa de proteínas.

Esta variabilidad afecta la confianza de los datos. Además, aumenta el potencial de introducción de artefactos no relacionados con el producto durante la manipulación manual de muestras.

La solución Multi-Attribute Method (MAM)

MAM ha sido ampliamente adoptado por la industria bioterapéutica y los principales regularoder en los últimos años. Las principales empresas biofarmacéuticas están realizando inversiones significativas para establecer un flujo de trabajo MAM para probar en el futuro el desarrollo y la fabricación de sus productos bioterapéuticos.

Históricamente, la implementación MAM no ha sido fácil ni rápida debido a la ausencia de una solución MAM comercial completa. Los científicos han tenido que ensamblar múltiples componentes de hardware y software diseñados originalmente para diferentes propósitos. Tales soluciones MAM a menudo requieren usuarios expertos en MS y no están libres de desafíos cuando se implementan en entornos de control de calidad y desarrollo de procesos.

Siendo el proveedor líder de soluciones bioterapéuticas y un socio confiable, Thermo Fisher Scientific ha estado trabajando en estrecha colaboración con los líderes de la industria para desarrollar una solución MAM perfecta y adecuada para su propósito. Se ha logrado una mejora significativa con la introducción de Thermo Scientific MAM 2.0 desde el lanzamiento inicial de HR MAM en 2019.

Columnas para Pep Mapping

Accucore Vanquish® C18+

Alta Resolución

Las Columnas de UHPLC Thermo Scientific™ Accucore™ Vanquish™ proporcionan una solución cromatográfica robusta para mejorarlos flujos de trabajo y la productividad del laboratorio. Estas columnas, con los sistemas Vanquish™ UHPLC, ofrecen potentes separaciones para resolver sus desafíos analíticos rápida y eficazmente.

Estas columna UHPLC con partícula de 1,5 μm de núcleo sólido combinan las ventajas de un material de núcleo sólido y la mayor eficacia cromatográfica de las partículas sub-2μm.

Los laboratorios analíticos modernos siguen requiriendo flujos de trabajo de mayor velocidad que requieren mejores separaciones, más resultados y una interacción más fácil a un costo reducido.
Las columnas de UHPLC Accucore™ Vanquish™ le permiten conseguir estos objetivos.

Hypersil GOLD VANQUISH® UHPLC

Ofrecemos Separaciones Potentes
Las columnas Thermo Scientific™ Accucore™ Vanquish™ y VANQUISH UHPLC se desarrollaron para complementar las características de rendimiento del sistema UHPLC Vanquish™.
Ofrecen una mayor selectividad y flexibilidad de formato, en combinación con la mayor eficacia cromatográfica de partículas de menor tamaño.
La solución de columna y sistema UHPLC le permite lograr los mejores resultados posibles en su aplicación y ofrece:
 Mejores separaciones: la alta eficacia permite la separación de mezclas muy complejas
 Más resultados: alta eficacia a altos caudales
 Interacciones más fáciles: solución de flujo de trabajo perfecta, para separaciones simples y fáciles
 Capaz de operar con presión de hasta 21000 psi/1500 bar

Columnas HPLC Acclaim® VANQUISH® C18

Columnas de Fase Inversa de alto rendimiento.

Las columnas Acclaim® VANQUISH® C18 han sido diseñadas para separaciones de alta resolución en Fase Inversa. El elevado recubrimiento superficial y el contenido muy bajo de metales resultan en columnas de excelentes eficacias.

Acclaim® VANQUISH® C18 se desarrollaron con el sistema Vanquish UHPLC para aprovechar sus capacidad de mayor presión y robustez.

Estas columnas permiten un  rendimiento excepcional en una amplia variedad de aplicaciones en la industria farmacéutica, química, ambiental y alimentaria.

Blog…

Eliminando Cuellos de Botella en Síntesis Orgánica con Procesos de Purificación Optimizados

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La síntesis orgánica es tanto una ciencia precisa como un arte, como lo afirma el químico de productos naturales K.C. Nicolaou de la Universidad de Rice (1). La síntesis orgánica implica replicar moléculas complicadas de sistemas naturales y crear en un laboratorio productos similares que puedan ser usados como productos farmacéuticos, combustibles, agrícolas y muchos otros materiales de uso diario

Selección del Método de Purificación y de las Columnas FLASH en UPFP

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En este caso, el objetivo de la purificación es, básicamente, la eliminación de un reactivo en exceso, que absorbe fuertemente en el visible,  sobre el API de interés que absorbe entre 210 y 220 nm. Los resultados obtenidos con estrategias convencionales no son lo suficientemente buenos y se requiere una segunda purificación.

En LC-Prep la presión no es tan importante

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Hasta hace pocos años los equipos destinados a purificaciones mediante Cromatografía de Baja Presión (FLASH) se diseñaban con el objetivo de ser simples y, en cierta medida, lo más económicos posible. El corazón del sistema es una bomba de muy alto caudal y baja presión.

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