Análisis de Conjugados Anticuerpo-Droga (ADC) por Cromatografía de Interacción Hidrofóbica (HIC) y de Fase Inversa (RP)
Original document:
Novel Hydrophobic Interaction HPLC Columns Designed for Monoclonal Antibody Analysis
© 2016 Thermo Fisher Scientic Inc. All rights reserved. All trademarks are the property of Thermo Fisher Scientic and its subsidiaries.
Introducción
Los ADCs han generado un tremendo interés entre las compañías farmacéuticas debido a su mayor eficacia clínica sobre los anticuerpos monoclonales nativos. La conjugación con drogas a menudo resulta en una molécula ADC que es heterogénea tanto frente a la distribución como a la carga de drogas citotóxicas en el mAb.
Se ha demostrado que la cantidad de droga unida al mAb afecta directamente a la seguridad y eficacia de la droga. Por lo tanto resulta crítico caracterizar y controlar completamente la heterogeneidad de los ADCs durante el desarrollo y producción.
La Cromatografía de Interacción Hidrofóbica (HIC) y la Cromatografía de Fase Inversa (RPC) resultan adecuadas en la separación de ADCs puesto que la unión de drogas tóxicas altera la hidrofobicidad del anticuerpo. En general el anticuerpo no conjugado menos hidrofóbico eluye antes y a medida que el número de drogas unidas aumenta también se incrementa el tiempo de retención.
Análisis de ADCs mediante Cromatografía de Interacción Hidrofóbica (HIC)
La columna MAbPac HIC-Butyl se basa en una fase de partículas poliméricas no porosas de 5 µm funcionalizadas con grupos butilo. La resina hidrofóbica ofrece biocompatibilidad mientras que la densidad óptima de grupos butilo ofrece separaciones de alta resolución. Una muestra de ADCs miméticos se ha analizado con una columna MAbPac HIC-Butyl. Los ADCs miméticos se conjugaron entre una droga mimética y un mAb vía el grupo sulfhidrilo de residuos intercadena de cisteína con el resultado de una mezcla de especies anticuerpo-droga con una carga entre 0 y 8 drogas (Ver Figura 1).
Figura 1. ADCs miméticos conjugados entre una droga mimética y un mAb
El mAb no modificado y los ADCs con DAR (relación Droga/Anticuerpo) entre 2 y 8 se resuelven bien en una columna MAbPac HIC-Butyl. (Ver Figura 2)
Figura 2. ADC miméticos analizados con una columna MAbPac HIC-Butyl
Análisis de ADCs mediante Cromatografía de Fase Inversa (RPC)
La columna MAbPac RP se basa en una fase de partículas poliméricas supermacroporosas de 4 μm.
La resina hidrofóbica de gran tamaño de poro con grupos fenilo, permite la separación eficiente de moléculas grandes como los mAbs y sus conjugados.
El cromatograma muestra un ADC creado con tecnología de marcaje sitio-específico de anticuerpos analizado con una columna MAbPac RP.
Figura 3. ADCs en MabPac RP
Los ADCs se prepararon activando enzimáticamente los glicanos del dominio Fc con azida y uniéndolos a Monometil auristatina E (MMAE). Con galactosidasa se escinde un resto de glicano y con el enzima beta-galactosiltransferasa se incorpora un mutante modificado con azida. Los anticuerpos modificados activados se conjugan con la toxina dibenzociclooctina (DIBO) -Val-Cit-PAB-Monometil Auristatina E (MMAE) con el resultado de una mezcla de anticuerpos cargados con 0 a 4 moléculas MMAE (ver Figura 4). El mAb sin modificar y los ADCs con DAR entre 0 a 4 se resuelven bien en la columna MAbPac RP.
Figura 4. ADCs en MabPac RP
Cómo pedir
Más Información
Visite las siguientes entradas si desea más información sobre las nuevas columnas para biocromatografía de Thermo Scientific:
-
- Determinación de la Concentración de mAb por Cromatografía de Afinidad)
- Separación de Agregados por Cromatografía de Exclusión (SEC)
- Análisis de Variantes de Carga por Cromatografía de Intercambio Iónico (IEC)
- Análisis de Variantes por Oxidación por Cromatografía de Interacción Hidrofóbica (HIC)
- Análisis de Conjugados Anticuerpo-Droga (ADC) por Cromatografía de Interacción Hidrofóbica (HIC) y de Fase Inversa (RP)
- Análisis de mAB’s Intactos y Fragmentos de mAb’s por Cromatografía de Fase Inversa (RPC)
- Mapa de Péptidos por Cromatografía de Fase Inversa (RPC)
- Análisis de Glicanos por Cromatografía de Modo Mixto(MMC) y Cromatografía de Interacción Hidrofílica (HILIC)
Advion e Interchim se han unido recientemente. Obtenga más información sobre los beneficios de la espectrometría de masas combinada y la cromatografía Flash en su nota de prensa: https://www.advion.com/advion-interchim-combination/
Cómo contactar con Cromlab
Para cualquier información adicional u oferta de productos contacte con nuestro Departamento Comercial.
Dejar un comentario
¿Quieres unirte a la conversación?Siéntete libre de contribuir!