Análisis de Glicanos por Cromatografía de Modo Mixto (MMC) y Cromatografía de Interacción Hidrofílica (HILIC)

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Maximize glycan structural information.
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La glicosilación es una de las Modificaciones Post-Translacionales (PTM’s) que más afectan al desarrollo de una proteína terapéutica. La mayoría de las proteínas candidatas en el desarrollo clínico y preclínico como las proteínas recombinantes y los anticuerpos monoclonales (mAb’s) son derivados glicosilados y su actividad biológica depende muchas veces de la estructura y tipo de los glicanos unidos a esas proteínas.

A causa del proceso de transferencia de los oligosacáridos al anticuerpo sus estructuras pueden ser extremadamente heterogéneas. La elucidación del rol de las estructuras de los glicanos de un anticuerpo es de gran importancia para el control del desarrollo y producción de anticuerpos clínicamente importantes y los productos farmacéuticos relacionados. Puesto que pueden existir variantes de carga, tamaño e isoméricas, su elucidación estructural resulta esencial en el desarrollo de proyectos bio-terapéuticos y bio-farmacéuticos.

Para superar los retos planteados ene el análisis de glicanos, Thermo Scientific ofrece tres tipos de columnas de diferente química y selectividad (ver Tabla 1).

Tabla 1. Fases disponibles en Thermo Scientific para el análisis de glicanos

Las columnas que normalmente se usan en el análisis de glicanos usan fases estacionarias en con grupos funcionales amídicos, amínicos o zwitteriónico, y el proceso de separación se basa principalmente por interacciones de enlace de hidrógeno.

La fase Accucore Amide-HILIC se ha diseñado para la separación de glicanos hidrofílicos y neutros. La Figura 1 muestra un ejemplo de glicanos de lgG humana analizados con Accucore Amide-HILIC.

Figura 1. Glicanos de lgG humana con Accucore Amide-HILIC

La columna GlycanPac AXH-1 de modo mixto combina tanto interacciones de Intercambio Aniónico Débil (WAX) y mecanismos HILIC para obtener una selectividad óptima y elevado poder resolutivo. Mientras que la función WAX ofrece retención y selectividad para glicanos cargados negativamente, el modo HILIC facilita la separación de glicanos con la misma carga  en función de su polaridad y tamaño.  

GlycanPac AXH-1 ha sido diseñada para la separación de glicanos neutros y cargados tanto en forma nativa como marcados  2AB.

La Figura 2 muestra una separación de glicanos marcados 2AB de fetuina bovina en la que se resuelven y detectan 35 compuestos en GlycanPac AXH-1 de 150×2.1mm y 1.9 μm.

Figura 2. 35 glicanos marcados 2AB en GlycanPac AXH-1

La columna GlycanPac AXR-1 de modo mixto combina mecanismos de retención  Intercambio Aniónico Débil (WAX) y mecanismos de Fase Inversa (RP). La funcionalidad WAX ofrece retención y selectividad para glicanos cargados negativamente, mientras que el modo RP facilita la separación de glicanos con la misma carga  en función de su estructura isomérica  y tamaño.

Como resultado GlycanPac AXR-1 ofrece la máxima resolución de glicanos cargados negativamente y marcados 2AB. La Figura 3 muestra una separación de glicanos marcados 2AB de fetuina bovina en la que se resuelven y detectan 59 compuestos en GlycanPac AXR-1 de 150×2.1mm y 1.9 μm.

Figura 3. 59 glicanos marcados 2AB en GlycanPac AXR-1

Visite las siguientes entradas si desea más información sobre las nuevas columnas para biocromatografía de Thermo Scientific:

• • Determinación de la Concentración de mAb por Cromatografía de Afinidad)
  • Separación de Agregados por Cromatografía de Exclusión (SEC)
  • Análisis de Variantes de Carga por Cromatografía de Intercambio Iónico (IEC)
  • Análisis de Variantes por Oxidación por Cromatografía de Interacción Hidrofóbica (HIC)
  • Análisis de Conjugados Anticuerpo-Droga (ADC) por Cromatografía de Interacción Hidrofóbica (HIC) y de Fase Inversa (RP)
  • Análisis de mAB’s Intactos y Fragmentos de mAb’s por Cromatografía de Fase Inversa (RPC)
  • Mapa de Péptidos por Cromatografía de Fase Inversa (RPC)
  • Análisis de Glicanos por Cromatografía de Modo Mixto(MMC) y Cromatografía de Interacción Hidrofílica (HILIC)

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