Separación de Agregados por Cromatografía de Exclusión (SEC)
Original whitepaper:
Breaking Through Bottlenecks in Organic Synthesis with a Streamlined Purification Workflow.
© 2011 Dionex Corporation
Introducción
Los mAbs producidos por cultivos celulares de mamíferos pueden contener cantidades significativas de dímeros y agregados de mayor orden. Los estudios muestran que esos agregados presentes en drogas pueden inducir una respuesta superior pero pueden también causar severas reacciones inmunogéncas y anafilácticas. Por esta razón las empresas biofarmacéuticas necesitan desarrollar métodos analíticos para controlar la heterogeneidad de tamaño y controlar los niveles de dímeros y otros agregados mayores.
La Cromatografía de Exclusión por Tamaño (SEC) resulta ser la elección ideal en la separación de agregados de mAb’s.
En SEC la separación se basa únicamente en el tamaño de la molécula (no hay interacción con la fase estacionaria) que penetra en el poro de la fase en diferente grado haciendo que los analitos viajen por la columna a diferentes velocidades. Las moléculas de tamaño más grande no penetran en los poros y, por lo tanto, eluyen antes.
Figura 1. Análisis de mAb’s a diferente concentración
La columna Thermo Scientific MAbPac SEC-1 ha sido especialmente diseñada para la separación y caracterización de anticuerpos monoclonales (mAb’s), sus agregados y para el análisis de fragmentos de Fab y Fc.
La fase consiste en partículas esféricas de 5µm de sílice porosa (300 Å) de alta pureza, covalentemente modificadas con una capa hidrofílica para eliminar totalmente las interacciones secundarias.
La fase estacionaria MAbPac SEC-1 permite el uso de diferentes tipos de eluyentes a base de fases móviles de alta o baja fuerza iónica, además de modificadores adecuados para LCMS.
Los tres tipos de formato de columna se usan en diferentes situaciones:
- Columna con D.I, de 7.8mm para una mayor resolución y mejor cuantificación de mAb’s y sus agregados
- Columna con D.I, de 4.0mm para la separación a línea de base de monómeros y dímeros de mAb con sólo la cuarta parte de la muestra necesaria con las columnas de 7.8mm
- Columna con D.I, de 2.1mm para caudales muy bajos y baja capacidad de carga, ideal para detección MS
Cómo pedir
Más Información
- Visite las siguientes entradas si desea más información sobre las nuevas columnas para biocromatografía de Thermo Scientific:
- Determinación de la Concentración de mAb por Cromatografía de Afinidad)
- Separación de Agregados por Cromatografía de Exclusión (SEC)
- Análisis de Variantes de Carga por Cromatografía de Intercambio Iónico (IEC)
- Análisis de Variantes por Oxidación por Cromatografía de Interacción Hidrofóbica (HIC)
- Análisis de Conjugados Anticuerpo-Droga (ADC) por Cromatografía de Interacción Hidrofóbica (HIC) y de Fase Inversa (RP)
- Análisis de mAB’s Intactos y Fragmentos de mAb’s por Cromatografía de Fase Inversa (RPC)
- Mapa de Péptidos por Cromatografía de Fase Inversa (RPC)
- Análisis de Glicanos por Cromatografía de Modo Mixto(MMC) y Cromatografía de Interacción Hidrofílica (HILIC)
Advion e Interchim se han unido recientemente. Obtenga más información sobre los beneficios de la espectrometría de masas combinada y la cromatografía Flash en su nota de prensa: https://www.advion.com/advion-interchim-combination/
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