En este caso, el objetivo de la purificación es, básicamente, la eliminación de un reactivo en exceso, que absorbe fuertemente en el visible, sobre el API de interés que absorbe entre 210 y 220 nm. Los resultados obtenidos con estrategias convencionales no son lo suficientemente buenos y se requiere una segunda purificación.
Hasta hace pocos años los equipos destinados a purificaciones mediante Cromatografía de Baja Presión (FLASH) se diseñaban con el objetivo de ser simples y, en cierta medida, lo más económicos posible. El corazón del sistema es una bomba de muy alto caudal y baja presión.
La Cromatografía FLASH es un método de purificación de compuestos de síntesis que se basa en Cromatografía de Líquidos de Media Presión, a diferencia de los sistemas tradicionales por gravedad en columna que son mucho más lentos e ineficientes.
La Cromatografía FLASH difiere de la cromatografía tradicional en columna básicamente por el mayor tamaño de las partículas del soporte, y en la menor contrapresión generada que no obliga al uso de una fuente de presión para generar el caudal de fase móvil necesario en columna.
Los Métodos de Purificación en Cromatografía FLASH, y especialmente en UPFP (Ultra Performance Flash Purification) se desarrollan, o deberían desarrollarse, con los datos obtenidos en separaciones previas en Cromatografía de Capa Fina (TLC) y seguir los pasos siguientes: Generar una mezcla binara que permita que los compuestos de interés estén comprendidos entre Rf 0.15 y Rf 0.35 para una separación óptima. Optimizar la separación modificando la fuerza y/o la selectividad del eluyente. Aumentar la velocidad transformando un método Isocrático a Gradiente
Los Métodos de Purificación en Cromatografía FLASH, y especialmente en UPFP (Ultra Performance Flash Purification) se desarrollan, o deberían desarrollarse, con los datos obtenidos en separaciones previas en Cromatografía de Capa Fina (TLC) y seguir los pasos siguientes: Generar una mezcla binara que permita que los compuestos de interés estén comprendidos entre Rf 0.15 y Rf 0.35 para una separación óptima. Optimizar la separación modificando la fuerza y/o la selectividad del eluyente. Aumentar la velocidad transformando un método Isocrático a Gradiente
En muchas situaciones, el uso de un método de purificación «Estándar» no permite obtener la separación necesaria para obtener productos con la máxima pureza.
Le proponemos una simple estrategia de 4 pasos que le permitirán obtener mejores resultados sin malgastar columnas o eluyentes.
Los solventes en HPLC se utilizan como:
Fases Móviles
Para disolver la muestra
Para preparar las muestras
El uso como Fases Móviles es de principal importancia puesto que sus propiedades han de mantenerse en límites estrechos de aceptabilidad. Además esas propiedades también influyen en la elección del solvente de disolución y el de preparación de la muestra.
La particularidad de un Detector Evaporativo por Dispersión de Luz (Evaporative Light Scattering Detector ELSD) es de ser universal: el 100% de los compuestos no volátiles y semi-volátiles se detectan como carbohidratos, péptidos, aminoácidos, azúcares (polisacáridos, oligosacáridos) PEG’s, proteínas a diferencia de un detector ampliamente usado como el UV que detecta sólo compuestos que tengan un grupo cromóforo.
Las columnas FLASH, a diferencia de las columnas de HPLC analítica, se suministran con un alto grado de empaquetamiento con la fase sin activar (secas), con el fin de ofrecer un coste contenido con una buena garantía de reproducibilidad.
Las Columnas Monolito Interchim® Peptides son Columnas FLASH preempacadas con un nuevo gel de sílice para Cromatografía de Fase Inversa que permite la purificación de péptidos y proteínas a alta velocidad con muy poca pérdida de carga.
ENTRADAS RECIENTES
- Nuevo Detector Evaporativo de Dispersión de Luz (ELSD) con Ajuste Automático de Ganancia (SAGA) para Cromatografía Preparativa y FLASH 4 agosto 2023
- Separación de Agregados por Cromatografía de Exclusión (SEC) 13 noviembre 2022
- Análisis de Glicanos por Cromatografía de Modo Mixto (MMC) y Cromatografía de Interacción Hidrofílica (HILIC) 13 noviembre 2022
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- Análisis de Conjugados Anticuerpo-Droga (ADC) por Cromatografía de Interacción Hidrofóbica (HIC) y de Fase Inversa (RP) 11 noviembre 2022
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